學(xué)會DNA的粗提取和鑒定的方法，觀察提取出來的DNA物質(zhì)。

DNA在氯化鈉溶液中的溶解度，是隨著氯化鈉的濃度變化而改變的。當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為0.14mol/L時，DNA的溶解度*低。利用這一原理，可以使溶解在氯化鈉溶液中的DNA析出。

DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA。

DNA遇二苯胺（沸水浴）會染成藍(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。

 

1. 鐵架臺 2. 玻璃棒(1個)

3. 濾紙 4. 量筒（100ml，1個）

5. 燒杯(100ml 1個, 50ml和500ml各2個 ) 6. 試管（20ml，2個）

7. 漏斗(1個) 8. 試管夾(2個)

9. 紗布(15塊) 10.離心機(jī)(1臺)

[實(shí)驗材料]

1. 雞血細(xì)胞液（5ml~10ml） 2. 95%乙醇（預(yù)冷24h）

3. 蒸餾水 4. 檸檬酸鈉(質(zhì)量濃度0.1g/ml)

5. 氯化鈉(2mol/L和0.015mol/L) 6. 二苯胺

7. 高氯酸 8.乙醛

9. 冰乙酸

實(shí)驗前需要制備雞血溶液，制備的方法是：取檸檬酸鈉的質(zhì)量濃度為0.1g/ml的溶液（抗凝劑）100ml，置于500ml燒杯中。將宰殺活雞流出的雞血（約180ml）注入燒杯中，同時用玻璃棒攪拌，使血液與檸檬酸鈉溶液充分混合，以免凝血。然后，將血液倒入離心管內(nèi)，用1000rpm離心2min，此時血細(xì)胞沉淀于離心管底部。實(shí)驗時，用吸管除去離心管上部的澄清液，就可以得到雞血細(xì)胞液（如果沒有離心機(jī)，可以將燒杯中的血液置于冰箱內(nèi)，靜置**，使血細(xì)胞自行沉淀）。

1． 提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)

將制備好的雞血細(xì)胞液5ml~10ml，注入到50ml燒杯中。向燒杯中加入蒸餾水20ml，同時用玻璃棒充分?jǐn)嚢?min，使血細(xì)胞加速破裂。然后，用放有紗布的漏斗將血細(xì)胞液過濾至500ml的燒杯中，取其濾液。

2． 溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA

將氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為2mol/L的溶液40ml加入到濾液中，并搖動燒杯，使其混合均勻，這時DNA載溶液中呈溶解狀態(tài)。

3． 析出含DNA的粘稠物

沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩加入蒸餾水，同時用玻璃棒不停地輕輕攪拌，這時燒杯中有絲狀物出現(xiàn)，注意觀察絲狀物呈什么顏色。繼續(xù)加入蒸餾水，溶液中出現(xiàn)的粘稠物會越來越多。當(dāng)粘稠物不再增加時停止加入蒸餾水（這時溶液中氯化鈉的物質(zhì)的量的濃度相當(dāng)于0.14mol/L）。

4． 濾取含DNA的粘稠物

用放有多層紗布的漏斗，過濾步驟3中的溶液至500ml的燒杯中，含DNA的粘稠物被留在紗布上。

5． 將DNA的粘稠物再溶解

取1個50ml燒杯，向燒杯內(nèi)注入氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為2mol/L的溶液20ml。用鈍頭鑷子將紗布上的粘稠物夾至氯化鈉溶液中，用玻璃棒不停地攪拌，使粘稠物盡可能多地溶解于溶液中。

6． 過濾含有DNA的氯化鈉溶液

取1個100ml燒杯，用放有兩層紗布的漏斗過濾步驟5中的溶液。取其濾液，DNA溶于濾液中。

7． 提取含雜質(zhì)較少的DNA

在上述濾過的溶液中，加入冷卻的、酒精的體積分?jǐn)?shù)為95%的溶液50ml（使用冷卻的酒精，對DNA的凝集效果較佳），并用玻璃棒攪拌，溶液中會出現(xiàn)含有雜質(zhì)較少的絲狀物。用玻璃棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。這種絲狀物的主要成分就是DNA。注意觀察絲狀物是什么顏色。

8． DNA的鑒定

取兩支20ml的試管，各加入氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為0.015mol/L的溶液5ml，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4ml的二苯胺試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min，待試管冷卻后，觀察并且比較兩支試管中溶液顏色的變化。將觀察的結(jié)果填寫在《實(shí)驗報告冊》上。