一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/div>
了解**接種、培養(yǎng)的一般程序；掌握單細(xì)胞**和多細(xì)胞**的菌絲、孢子的形態(tài)特點(diǎn)；掌握**不染色標(biāo)本直接檢查方法。
二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
（一）**的菌落觀察
觀察**菌落的形態(tài)特點(diǎn)及顏色有助于病原性**的鑒定。一般觀察**的菌落必需將**培養(yǎng)于沙保弱氏培養(yǎng)基（俗稱大培養(yǎng)），經(jīng)數(shù)日致十?dāng)?shù)日的培養(yǎng)后才可看到典型菌落。
1. 材料
（1）臨床標(biāo)本（可疑**感染）：毛發(fā)或皮屑。
（2）**菌種：新生隱球菌，白假絲酵母菌，絮狀表皮癬菌。
（3）沙保弱氏葡萄糖斜面培養(yǎng)基（含青、鏈霉素）。
（4）其它：70%酒精 、無菌生理鹽水 、平皿等。
2. 方法
（1）臨床標(biāo)本用70%酒精浸泡數(shù)分鐘，殺死表面雜菌，以無菌生理鹽水洗滌。
（2）將處理過的臨床標(biāo)本和實(shí)驗(yàn)室保存菌種分別接種于2~3只含有青、鏈霉素的沙保弱氏葡萄糖斜面培養(yǎng)基上，對臨床標(biāo)本直接將數(shù)根毛發(fā)或數(shù)塊皮屑接種。**菌種則用**接種環(huán)按斜面培養(yǎng)基接種法接種。
（3）置22~28℃培養(yǎng)2~3w或37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3~7d。
（4）一周觀察1~2次，臨床標(biāo)本連續(xù)培養(yǎng)3w無菌落生長者可報告陰性，如長出菌落，應(yīng)逐日觀察菌落形態(tài)及顏色變化。
3. 結(jié)果觀察
**的菌落從形態(tài)上可分三大類：酵母菌落、酵母樣（型）菌落及絲狀菌落。
（1）酵母菌落（觀察新生隱球菌培養(yǎng)物）：菌落為圓形、較白色，邊緣整齊表面光滑、濕潤，假菌絲不伸入到培養(yǎng)基內(nèi)，和表皮葡萄球菌菌落相似。
（2）酵母樣（型）菌落（觀察白假絲酵母菌）：表面和酵母菌落相似，但生成的假菌絲伸入培養(yǎng)基內(nèi)。
（3）絲狀菌落：觀察各種皮膚絲狀菌斜面培養(yǎng)物,菌落表面大都有氣生菌絲,肉眼觀察呈絨毛狀、粉狀、棉花樣等，故稱絲狀菌落，色澤多種多樣，紅色毛菌呈紫紅色，鐵銹色毛菌呈鐵銹色或棕色等，菌落底層有營養(yǎng)菌絲伸入培養(yǎng)基內(nèi)。
（二）**的形態(tài)觀察
1. 菌絲的形態(tài)
（1）梳狀菌絲：菌絲一側(cè)有多數(shù)短的分枝，間距不等，形如梳子，故名梳狀菌絲常見于許蘭氏毛菌。
（2）螺旋狀菌絲：某些菌絲呈螺旋狀彎曲，常見于石膏樣小孢子菌和許蘭氏毛菌。
（3）球拍樣菌絲：在菌絲分節(jié)處一端膨大，如網(wǎng)球拍樣，常見于小孢子菌（microsporum）及表皮癬菌(epidermophyton)。
（4）結(jié)節(jié)狀菌絲：菌絲纏繞成結(jié)節(jié)樣，常見于奧杜盎小孢子菌等。
（5）鹿角狀菌絲：菌絲末端膨大成鹿角狀，多見于許蘭氏毛菌。
（6）假菌絲：酵母菌（如：白假絲酵母菌）的菌體細(xì)胞延長分枝后并不脫落，形成類似菌絲的結(jié)構(gòu)。
2. 孢子的形態(tài)
（1）芽生孢子（blastospore）：從母細(xì)胞發(fā)芽而產(chǎn)生，如新生隱球菌（墨汁染色）。
（2）厚膜孢子(chlamydospore)：是從菌絲產(chǎn)生的一種大而圓形的孢子，于毛癬菌（trichophyton）及小孢子菌中常見。
（3）小分生孢子（micloconidia）：孢子為單細(xì)胞性孢子，常直接或由小側(cè)枝連接而生長于菌絲的側(cè)面。毛癬菌中?？梢姷叫》稚咦尤杭性诜种z末端，呈葡萄狀。也有圓形小分生孢子位于菌絲的旁側(cè)。
（4）大分生孢子（macroconidia）：是一種多細(xì)胞性孢子，常為梭形或棒形，多數(shù)大分生孢子具有數(shù)個橫隔，每個橫隔即為一個細(xì)胞。如絮狀表皮癬菌的大分生孢子為粗棍型或卵圓形，末端較粗而鈍圓，單一或簇生于菌絲端，大小孢子菌則為梭形大分生孢子。
（5）關(guān)節(jié)孢子（althrospore）：由菌絲細(xì)胞分化成幾個長方形的節(jié)段而成，胞壁也稍厚些，在陳舊培養(yǎng)物中?？沙霈F(xiàn)。
（三）**性皮屑的鏡檢
直接檢查**感染的皮屑標(biāo)本，進(jìn)行涂片檢查，可直接觀察到**的結(jié)構(gòu)——菌絲和孢子。該法雖不能確定**的菌種（少數(shù)**除外），但卻可以直接迅速地確定是否為**感染。
1. 材料
（1）患者皮屑標(biāo)本。
（2）封固液：10%氫氧化鉀。
（3）乳酸酚棉藍(lán)染液。
2. 方法
（1）不染色標(biāo)本的檢查
①標(biāo)本制作：取少量標(biāo)本于載玻片上，滴加一滴封固液，上覆蓋玻片，將載玻片放在火焰上方微加熱，使組織或角質(zhì)溶解，但切勿過熱以免產(chǎn)生氣泡或烤干．也可將蓋片稍加按壓，使溶解的組織分散并使其透明，吸去周圍溢液避免沾污蓋玻片。
②檢查先用低倍鏡檢查有無**菌絲或孢子，再以高倍鏡檢查菌絲、孢子的特征。鏡檢時用稍弱的光線使視野稍暗為宜、低倍鏡下菌絲呈折光性較強(qiáng)、綠色纖維分枝絲狀體；高倍鏡下，菌絲呈分隔或呈節(jié)孢子，有時菌絲末端有較粗短的關(guān)節(jié)孢子。
（2）乳酸酚棉藍(lán)染色法
取潔凈玻片一塊，滴加一滴染液，將皮屑標(biāo)本放于染色液中，加上蓋玻片（加熱或不加熱）后鏡檢。結(jié)果**染成藍(lán)色。