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瘦肉精的多種檢測方法

    瘦肉精是一類**,而不是一種特定的物質(zhì),是指能夠促進瘦肉生長的飼料添加劑。任何能夠促進瘦肉生長、抑制肥肉生長的物質(zhì)都可以叫做“瘦肉精”。目前,能夠?qū)崿F(xiàn)這種功能的物質(zhì)是一類叫做β-興奮劑(β-agonist)的**,比如在中國造成中毒的克倫特羅(clenbuterol)和美國允許使用的雷托巴胺(Ractopamine)。在中國,通常所說的“瘦肉精”則是指克倫特羅。它曾經(jīng)作為**用于**支氣管**,后由于其副作用太大而遭禁用。

中文名:瘦肉精;克倫特羅;學(xué)名鹽酸克倫特羅;是一種平喘藥。該**既不是獸藥,也不是飼料添加劑,而是腎上腺類神經(jīng)興奮劑。鹽酸雙氯醇胺;克喘素;氨哮素;氨必妥;氨雙氯喘通;氨雙氯醇胺。
英文名:CLENBUTEROL
CAS: 37148-27-9
理化特性:白色或類白色的結(jié)晶粉末,無臭、味苦,熔點161℃,溶于水、乙醇,微溶于丙酮,不溶于乙醚。    


檢測
氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)
GC-MS法優(yōu)點是把色譜高效快速的分離效果和質(zhì)譜高靈敏度的定性分析有機合起來,能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進行定性、定量分析,而且具更高的檢測極限。Fente C. A等用GC-MS法檢測牛毛中CLB的殘留,*低檢測限為5ng/g;Pteer Batioens應(yīng)用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS-MS)對牛、羊、豬組織中的CLB含量進行檢測,*低檢測限為2ng/g;劉琪等用GC-MS法(EI離子源)檢測豬尿中的CLB,檢測限為0.5ng/mL;VanRhijin等用**基硅基或2-二甲基硅基嗎啉衍生物檢測尿提取物中的CLB,衍生物用電脈沖方式或化學(xué)離子化方式掃描,會產(chǎn)生更高的靈敏度。另外,GC-MS法與HPLC法相比,檢測靈敏度更高,假陽性率更低。因此,我國將GC-MS法定為檢測CLB的確證性方法(NY/T468~2001)。
高效液相色譜法(HPLC)
HPLC適合測定熱不穩(wěn)定和強極性的β-激動劑及其代謝產(chǎn)物,而且,HPLC可以與柱前提取、純化及柱后熒光衍生化反應(yīng)和質(zhì)譜(MS)等系統(tǒng)聯(lián)用,容易實現(xiàn)分析過程的自動化。黃士新等(1995)應(yīng)用紫外檢測器,在λ=243nm,色譜柱:shimpackCLC-ODS150×6.0mn,流速:1mL/min,柱溫:室溫30℃的條件下檢測豬肝臟和豬肉中的CLB殘留,*低檢測限可達2ng/g[4]。國外有人應(yīng)用HPLC (二極管陣列檢測器)測定動物性食品中CLB殘留,測得*低檢測限為1.26ng/g,回收率達98.9%[5]。目前,我國已將HPLC法作為檢測CLB殘留的半確證性方法,*低檢測限范圍為1~15ng/g,其優(yōu)點是專屬性好、選擇性強、檢測**度較高,而且假陽性率低;缺點是樣品處理時間長,檢測過程煩瑣、難于操作,需貴重儀器,在實際應(yīng)用中受到一定的限制。
酶聯(lián)**吸附法(ELISA )
利用**學(xué)抗原抗體特異性結(jié)合和酶的高效催化作用,通過化學(xué)方法將植物辣根過氧化物酶(HRP)與克倫特羅(CL)結(jié)合,形成酶偶聯(lián)克倫特羅。將固相載體上已包被的抗體(羊抗兔IgG抗體)與特異性的抗克倫特羅抗體結(jié)合,然后加入待測克倫特羅和酶偶聯(lián)克倫特羅,它們競爭性與克倫特羅抗體結(jié)合,洗滌后加底物,根據(jù)有色物的變化計量待測克倫特羅量。若待測克倫特羅多,則被結(jié)合的酶偶聯(lián)克倫特羅少,有色物量就少。用目測法或比色法測定樣品中的克倫特羅含量,比色的*佳波長為450 nm,參比波長應(yīng)大于600 nm。
膠體金**層析法(Colloidal gold immunochromatography)
利用競爭法膠體金**層析技術(shù),檢測液中的Clen與金標(biāo)墊上的金標(biāo)抗體結(jié)合形成復(fù)合物,若Clen在檢測液中濃度低于靈敏度值,未結(jié)合的金標(biāo)抗體流到T區(qū)時,被固定在膜上的Clen-BSA偶聯(lián)物結(jié)合,逐漸凝集成一條可見的T線;若Clen濃度高于靈敏度值,金標(biāo)抗體全部形成復(fù)合物,不會再與T線處Clen-BSA偶聯(lián)物結(jié)合形成可見T線。未固定的復(fù)合物流過T區(qū)被C區(qū)的二抗捕獲并形成可見的C線。C線出現(xiàn)則表明**層析發(fā)生,即試紙有效.
檢驗方法
1. 在進行測試前先完整閱讀使用說明書,使用前將試劑板和待檢樣本溶液恢復(fù)至室溫。
2. 撕開鋁塑袋,取出試紙。
3. 依據(jù)型號進行操作(尿液不得直接浸濕觀察區(qū))。
3.1 將試紙白色一端浸入尿液中(液面不得超過橫線),保持5秒鐘;
3.2 用滴管吸取待檢樣品尿液,逐滴緩慢加入3滴樣品于加樣孔中。
4. 將試紙平放1分鐘,等待紅色條帶出現(xiàn)。
5. 3~8分鐘內(nèi)讀取結(jié)果,10分鐘后判讀無效。
6. [1]  10分鐘內(nèi)可以檢測出結(jié)果
結(jié)果判讀
陽性(+):僅質(zhì)控區(qū)(C)出現(xiàn)一條紫紅色條帶。在測試區(qū)(T)內(nèi)無紫紅色條帶出現(xiàn)。
陰性(-):兩條紫紅色條帶出現(xiàn)。一條位于測試區(qū)(T)內(nèi),另一條位于質(zhì)控區(qū)(C)內(nèi)。
無效:質(zhì)控區(qū)(C)未出現(xiàn)紫紅色條帶,提示測試失敗或試 紙已失效。
注意:測試區(qū)(T)內(nèi)的紫紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺的現(xiàn)象。但是,在規(guī)定的觀察時間內(nèi),不論該色帶顏色深淺,即使只有非常弱的色帶也應(yīng)判定為陰性結(jié)果。
注意事項
1.檢測卡請在保質(zhì)期內(nèi)一次性使用。
2.檢測時避免陽光直射和電風(fēng)扇直吹。
3.盡量不要觸摸檢測卡中央的白色膜面。
4.尿樣滴管不可混用,以免交叉污染。
5.如果尿樣出現(xiàn)沉淀或渾濁物,請離心后再檢測。

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