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公司動(dòng)態(tài)

分子生物學(xué)常用試劑的配制


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1．LB(Luria-Bertani)培養(yǎng)液、平板的配制

配制每升LB培養(yǎng)液，應(yīng)在950ml去離子水中加入：
**培養(yǎng)用酵母提取物（bacto-yeastextract） 5g
**培養(yǎng)用胰化蛋白胨（bacto-tryptone）10g
NaCl 10g
搖動(dòng)容器直至溶質(zhì)完全溶解，用5mol/LNaOH(約0.2ml)調(diào)節(jié)pH值至7.0，加入去離子水至總體積為1L，在 15 1bf/in2(1.034×105Pa)高壓下蒸汽** 20min。
LB 瓊脂平板的配制：
先按上述配方配制液體培養(yǎng)基，臨高壓**前加入瓊脂糖 15g /L，同法高壓蒸汽** 20min。從高壓**器取出培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)輕輕旋動(dòng)以使熔解的瓊脂糖能均勻分布于整個(gè)培養(yǎng)基溶液中，應(yīng)使培養(yǎng)基降溫至50℃時(shí)，加入***等不耐熱的物質(zhì)。為避免產(chǎn)生氣泡，混勻培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)采取旋動(dòng)的方式，然后可直接從燒瓶中傾出培養(yǎng)基鋪制平板。90mm直徑的培養(yǎng)皿約需30－50ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)基完全凝結(jié)后，應(yīng)倒置平皿并貯存于4℃?zhèn)溆谩?/span>

2．瓊脂糖凝膠的配制
根據(jù)所需凝膠的濃度秤取瓊脂糖，加入相應(yīng)電泳緩沖液中，用微波爐加熱煮沸至瓊脂糖完全溶解，加入適量 EB 混勻，適當(dāng)冷卻后傾入凝膠鑄槽中，插入梳子，凝膠厚度不超過梳孔，如有氣泡產(chǎn)生則用玻璃棒驅(qū)除，不能過早拔除梳子，應(yīng)待凝膠完全凝結(jié)后才能拔除梳子。

3．P1、P2、P3的配制

P1 的配制：在 800ml 去離子水中溶入 Tris 堿 6.06g，Na2EDTA?2H2O 3.72g，用 HCl 調(diào)整 pH 至 8.0，用去離子水調(diào)整容積至1升，每升P1內(nèi)加入RNaseA100mg。

P2 的配制：在 950ml 去離子水中溶入 NaOH 8.0g，20％SDS 50ml，調(diào)整容積至 1 升。
P3 的配制：在 500ml 去離子水中溶入醋酸鉀 294.5g，用冰醋酸調(diào)整 pH 值至 5.5，用去離子水調(diào)整容積至1升。

4．常用緩沖液：
TE
pH 7.4
10mmol/LTris?Cl (pH7.4)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
pH 7.6
10mmol/LTris?Cl (pH7.6)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
pH 8.0
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
STE(亦稱 TEN)
0.1mmol/L NaCl
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
STET
0.1mmol/L NaCl
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
5%Triton X-100
TNT
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
150mmol/L NaCl
0.05% Tween 20
電泳緩沖液

Tris-乙酸（TAE）：50×濃貯存液（每升）：242g Tris 堿


5   7.1ml 冰乙酸
100ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)使用時(shí)再稀釋50倍。
Tris-磷酸（TPE）：10×濃貯存液（每升）：108g Tris 堿
15.5ml 85％磷酸（1.679g /ml）
40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用時(shí)再稀釋10倍。
Tris-硼酸（TBE）：5×濃貯存液（每升）：54g Tris 堿
27.5g 硼酸20ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) 使用時(shí)再稀釋10倍。
堿性緩沖液：1×使用液（每升）：5ml10mol/L NaOH
2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
Tris-甘氨酸：5×濃貯存液（每升）：15.1g Tris 堿
94g 甘氨酸（電泳級(jí)）（pH8.3）
50ml 10%SDS（電泳級(jí)）
2×SDS 凝膠加樣緩沖液
100mmol/L Tris?HCl(pH6.8)
200mmol/L 二硫蘇糖醇（DTT）
4%SDS（電泳級(jí)）
0.2％溴酚藍(lán)
20％甘油
30％丙烯酰胺：
將29g 丙烯酰胺和1gN,N’－亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中，加熱至37℃溶解之，補(bǔ)加
水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45孔徑)過濾**查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0，置棕色瓶中保存于室溫。
10mol/L 乙酸銨：把770g 乙酸銨溶解于800ml水中，加水定容至1L后過濾**。

1mol/LCaCl2：在200ml純水中（Milli-Q水或相當(dāng)級(jí)別的水）溶解54gCaCl2?6H2O，用0.22濾器過濾**，分裝成10ml小份貯存于－20℃。
2.5mol/LCaCl2：在20ml蒸餾水中溶解13.5gCaCl2?6H2O，用0.22濾器過濾**，分裝成1ml小份貯存于－20℃。
1mol/L 二硫蘇糖醇（DTT）：用20ml0.01mol/L乙酸鈉溶液（pH5.2）溶解3.09gDTT，過濾**后分裝成1ml小份貯存于－20℃。
0.5mol/LEDTA(pH8.0)：在 800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na?H2O），在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH至8.0，然后定容至1升，分裝后高壓**備用。
溴化乙錠（10mg/ml）：在100ml水中加入1g 溴化乙錠，磁力攪拌數(shù)小時(shí)以確保其完全溶解，然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，保存于室溫。

1mol/LMgCl2：
在800ml水中溶解203.3gMgCl2?6H2O，用水定容至1升，分裝成小份并高壓**備用。

酚：氯仿：
把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆蓋等體積的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液層，保存于4℃。

磷酸緩沖鹽溶液（PBS）：
在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH 值至 7.4，加水定容至 1 升，高壓蒸汽** 20min。保存于室溫。
乙酸鉀溶液（用于堿裂解）：
在60ml 5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水，即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度5mol/L的溶液。
3mol/L 乙酸鈉(pH5.2 和 7.0)：
在800ml水中溶解408.1g 三水乙酸鈉，用冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2或用稀乙酸調(diào)節(jié)pH至7.0，加水定容至1升，分裝后高壓**。
1mol/LTris：
在800ml水中溶解121.1gTris堿，加入濃HCl調(diào)節(jié)pH至所需值。
pH HCl
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
應(yīng)使溶液冷至室溫后方可*后調(diào)定pH值，加水定容至1升，分裝后高壓**。

Tris 緩沖鹽溶液（TBS）：
在800ml蒸餾水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris堿，加入0.015酚紅并用HCl調(diào)pH值至7.4，用蒸餾水定容至1升，分裝后在15lbf/in2(1.34×105Pa)高壓下蒸汽**20分鈡，于室溫保存。

5mmol/LNH4Ac 溶液：
秤取乙酸銨192.7g，加重蒸水250ml混勻，加重蒸水定容至500ml，1.1kg/cm2**20min。

10mg/mlBSA（小牛血清白蛋白）溶液：
秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml**重蒸水中。置4℃冰箱貯存?zhèn)溆谩?/span>

10%十二烷基硫酸鈉（SDS）：
在900ml水中溶解100g 電泳級(jí)SDS，加熱至68℃助溶，加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.2，加入水定容至1L，分裝備用。
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