TaqMan探針對于大家來說不是什么新名詞了，然而你知道嗎，對于部分降解的RNA，如福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）樣品中的RNA，TaqMan引物探針的設計有更多的講究，你知道這是為什么嗎？

FFPE樣本在固定時導致核酸相互交聯(lián)且片段化，RNA片段的大小在50-300 nt，大部分片段在100 nt左右，這些沒有3'端的RNA不能使用oligo-dT來逆轉(zhuǎn)錄，如用隨機引物大量非目標RNA模板（如tRNA, rRNA）產(chǎn)生的cDNA又影響了目標RNA片段檢測的靈敏度，因此*好是使用特異性引物。在引物探針設計時就需要特別考慮擴增片段不能太長，否則那些降解的RNA片段無法被檢測到，導致得到的結(jié)果不準確。

QIAGEN 全新發(fā)布的TaqMan引物探針 - QuantiFast Probe Assays就特別考慮到了<100 nt的RNA模板，經(jīng)過QIAGEN獨特的設計體系, 這些降解的RNA模板也能夠被檢測到，這對于FFPE樣品的基因表達分析非常關鍵。因此，相比較普通的TaqMan探針，QuantiFast Probe Assays能夠更靈敏地檢測到降解的RNA模板，分析結(jié)果更可靠。QuantiFast Probe Assays目前涵蓋人、小鼠和大鼠的所有的基因，包含一對預混合的引物和一條TaqMan探針。有兩種染料標記可供選擇：FAM（適合所有基因）和MAX（適合特定的參考基因）。

另外由于FFPE樣品中的核酸高度片段化且相互交聯(lián)，抽提得到的RNA中有較多的基因組DNA片段殘留，這些殘留的gDNA也會被擴增出來，嚴重影響了基因表達分析結(jié)果的真實性。

QIAGEN 全新發(fā)布的探針法檢測試劑盒 -QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit解決了gDNA干擾的問題，這是全球頭個整合了gDNA去除功能的熒光定量RT-PCR試劑盒。它包含了獨特的gDNA去除緩沖液, 只需要擴增前在室溫下經(jīng)過5-10分鐘的孵育即可去除gDNA，非常方便地解決了各種樣品尤其是FFPE樣品中gDNA殘留的問題。而且，QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit還整合了幾項QIAGEN在real-time RT-PCR試劑上的**：

? 包含MP因子，使其非常適合用于雙重反應, 可在同管中擴增目標和內(nèi)參基因，提高結(jié)果可比性，且節(jié)省成本。MP因子提高了模板周圍的引物和探針濃度，并穩(wěn)定了特異結(jié)合的引物和探針，實現(xiàn)多對引物探針同時高效地工作。

? 包含了Q-Bond分子，加快了退火和延伸的速度，節(jié)省多至50%時間。Q-Bond提高了引物和Taq酶之間的親和性，加快退火和延伸，且不會影響靈敏度和特異性。

當然，此試劑秉承了QIAGEN 快速real-time RT-PCR試劑盒一貫使用的熱啟動Taq酶HotStar Taq plus及K+、NH4+緩沖液體系，提高了結(jié)果的特異性和靈敏度。逆轉(zhuǎn)錄使用了Omniscript和Sensicript兩種逆轉(zhuǎn)錄酶的混合，無論是高豐度或低豐度的RNA模板都能高效地逆轉(zhuǎn)錄。

將QuantiFast Probe Assays和QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit配合使用，再加上QIAGEN在核酸純化領域提供的各種優(yōu)化方案，無論是遇到什么種類的樣品，即便是FFPE樣品，基因表達分析都可以輕松應對了。

RNA片段化不是問題，gDNA殘留也不是問題，你是不是信心大增了呢？