[實驗?zāi)康腯
用不同頻率的電刺激(*大刺激強度)作用于坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本，觀察刺激頻率與收縮反應(yīng)之間的關(guān)系，了解復(fù)合收縮的形成過程。
[實驗原理]
不同的刺激頻率可使骨骼肌出現(xiàn)不同的收縮形式。若刺激頻率較低，刺激間的時間間隔大于肌肉縮短期和舒張期的時間，則肌肉出現(xiàn)一連串的單收縮。若刺激頻率逐漸增加，刺激間隔逐漸縮短，肌肉的收縮反應(yīng)可以融合，如果后一個刺激落在前一收縮的舒張期內(nèi)，則產(chǎn)生不完全強直收縮，如果后一個刺激落在前一收縮的縮短期內(nèi)，肌肉處于持續(xù)的收縮狀態(tài)，產(chǎn)生完全強直收縮。
[實驗器材與藥品]
MD-2000微機(jī)化實驗教學(xué)系統(tǒng)，蛙類手術(shù)器械，張力換能器，肌動器，鐵支架，雙凹夾，培養(yǎng)皿 ，鋅銅弓，任氏液等。
[實驗對象]
蟾蜍或蛙。
[實驗步驟和方法]
1.制備坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本
(1)破壞腦和脊髓：左手握蟾蜍，用示指(食指)壓其頭部前端使其盡量前俯。右手持探針 在頭后緣枕骨大孔處垂直刺入椎管，再將探針折向前方刺人顱腔，插入顱腔后探針向左右攪動，徹底搗毀腦組織，然后將探針退出至枕骨大孔處，再將探針刺向尾側(cè)，逐漸插入整個椎管搗毀脊髓。此時蟾蜍下頜呼吸運動應(yīng)消失，四肢松軟，無自發(fā)運動，表示腦和脊髓已破壞完全。否則，須按上法再行搗毀。
(2)剪除軀干上部及內(nèi)臟：左手抓住蟾蜍脊柱，右手持粗剪刀，在骶髂關(guān)節(jié)前1cm處剪斷脊柱。再沿脊柱兩側(cè)剪開腹壁，此時軀干上部和內(nèi)臟全部下垂，剪除軀干上部和內(nèi)臟。在腹側(cè)脊柱的兩旁可見到坐骨神經(jīng)。
(3)剝?nèi)テつw：左手用大鑷子捏住脊柱斷端(避開神經(jīng))，右手捏住脊柱斷端皮膚邊緣，逐步向下牽拉剝離皮膚，拉至大腿時，如阻力太大，可先剝下一側(cè)后肢皮膚，再剝另一側(cè)后肢皮膚，全部皮膚剝除后，將標(biāo)本置于盛有任氏液的培養(yǎng) 皿中。手及用過的器械用自來水沖洗。
(4)分離兩腿：用粗剪刀沿中線將脊柱剪成左右兩半，再從恥骨聯(lián)合中央剪開(為保證兩側(cè)坐骨神經(jīng)完整，應(yīng)避免剪時偏向一側(cè))。將已分離的兩腿浸入盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。
(5)游離坐骨神經(jīng)：取蛙腿一條，用玻璃分針沿脊柱游離坐骨神經(jīng)腹腔部。然后用蛙釘將標(biāo)本背面向上固定于蛙板上，循股二頭肌和半膜肌之間的坐骨神經(jīng)溝，縱向分離坐骨神經(jīng)的大腿部分，直至腘窩脛腓神經(jīng)分叉處。用玻璃分針劃開梨狀肌及其附近的結(jié)締組織。將脊柱多余部分剪去，保留小塊與坐骨神經(jīng)相連的脊柱。用鑷子夾住這小塊脊柱，將坐骨神經(jīng)輕輕提起，自上而下剪斷坐骨神經(jīng)分支，游離出坐骨神經(jīng)。
(6)完成坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本：在膝關(guān)節(jié)周圍剪斷股二頭肌肌腱、半膜肌肌腱、股四頭肌肌腱等大腿肌肉的肌腱，以去掉大腿全部肌肉，并用粗剪刀將股骨刮干凈，在股骨的中段剪斷。再在腓腸肌的跟腱處穿線結(jié)扎，在結(jié)扎處遠(yuǎn)端剪斷腓腸肌肌腱，游離腓腸肌至膝關(guān)節(jié)處，輕提結(jié)扎線，將腓腸肌提起，然后在膝關(guān)節(jié)下方將小腿其余部分全部剪除。
用浸有任氏液的鋅銅弓觸及坐骨神經(jīng)，如腓腸肌收縮，則表明標(biāo)本的機(jī)能良好。將標(biāo)本放入任氏液中，待其興奮性穩(wěn)定后再進(jìn)行實驗。
2.實驗裝置的連接與使用
(1)將張力換能器和肌動器用雙凹夾固定在鐵支架上，張力換能器在上，肌動器在下。
(2)將坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本固定在肌動器內(nèi)。標(biāo)本中的股骨置于肌動器的固定孔內(nèi)，坐骨神經(jīng)置于肌動器的刺激電極上，腓腸肌跟腱的結(jié)扎線固定在張力換能器的彈**上，此連線不宜太緊或太松，并與桌面垂直。
(3)換能器的輸出端插入MD-2000微機(jī)化實驗教學(xué)系統(tǒng)的4通道，系統(tǒng)的刺激輸出與肌動器的刺激電極相連。
(4)打開MD-2000微機(jī)化實驗教學(xué)系統(tǒng)，進(jìn)入“骨骼肌的單收縮和復(fù)合收縮”實驗，詳細(xì)操作見MD-2000微機(jī)化實驗教學(xué)系統(tǒng)。
3.觀察項目：
(1)找出*大刺激強度：先給標(biāo)本單個弱刺激，然后逐步增大刺激強度，直到剛能描記出收縮曲線時，此時的強度為閾強度。低于閾強度的刺激為閾下刺激。繼續(xù)增加刺激強度，肌肉收縮曲線的幅度也逐漸增大，但當(dāng)達(dá)到一定的刺激強度時，肌肉收縮曲線的幅度便不再隨著刺激強度的增大而增高。剛能引起*大收縮反應(yīng)的刺激強度為*大刺激強度。
(2)單收縮：選用*大刺激強度，將刺激頻率放在單刺激或低頻刺激上，描記單收縮曲線。
(3)不完全強直收縮：增加刺激頻率，可描記出呈鋸齒狀的不完全強直收縮曲線。
(4)完全強直收縮：繼續(xù)增加刺激頻率，則可描記出平滑的完全強直收縮曲線。
[注意事項]
1.小心蟾酥濺入眼內(nèi)。
2.剝皮后須將手及用過的器械洗凈，再進(jìn)行下一步操作。
3.用玻璃分針去除神經(jīng)周圍的結(jié)締組織，避免用力牽拉神經(jīng)或用金屬器械夾捏神經(jīng)，以防神經(jīng)損傷。
4.標(biāo)本制成后須放在任氏液中浸泡數(shù)分鐘，使標(biāo)本興奮性穩(wěn)定。在實驗過程中也需經(jīng)常用任氏液濕潤標(biāo)本，以免影響標(biāo)本的機(jī)能。
5.每次連續(xù)刺激一般不要超過3~4s，每次刺激以后必須讓肌肉有一定的休息時間(0.5~1 min)，以防標(biāo)本疲勞。
6.用*大刺激強度刺激時，不能刺激過強而損傷神經(jīng)。刺激強度不能大于*大刺激強度。
[問題及解釋]
1.未能找出*大刺激強度。
雖已調(diào)至刺激器的*大刺激強度，但經(jīng)液體介質(zhì)短路后輸出，強度有所降低，對刺激的神經(jīng)仍達(dá)不到*大刺激強度，此時可加大刺激波寬。
2.隨刺激頻率增加，肌肉復(fù)合收縮的幅度不是逐漸升高而是下降。
標(biāo)本保護(hù)不當(dāng)，肌肉受損或疲勞或刺激頻率過高。
3.單收縮曲線忽高忽低
標(biāo)本在任氏液中浸泡的時間不夠，興奮性不穩(wěn)定或不是*大刺激強度進(jìn)行刺激。
4.標(biāo)本發(fā)生不規(guī)則收縮或痙攣
肌槽不干凈，留有刺激物;周圍環(huán)境有強電場干擾;儀器接地**或人體感應(yīng)帶電潮濕臺面和鐵支架等。
