產(chǎn)品物理參數(shù)
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常用名
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LRRK2-IN-1
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英文名
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LRRK2-IN-1
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CAS號(hào)
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1234480-84-2
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分子量
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570.685
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密度
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1.3±0.1 g/cm3
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沸點(diǎn)
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787.8±70.0 °C at 760 mmHg
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分子式
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C31H38N8O3
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熔點(diǎn)
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無資料
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閃點(diǎn)
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430.3±35.7 °C
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LRRK2-IN-1用途
LRRK2-IN-1 是一種有效的，選擇性的 LRRK2 抑制劑，作用于 LRRK2 (G2019S) 和 LRRK2 (WT)，IC50 值分別為 6 nM 和 13 nM。
LRRK2-IN-1生物活性
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描述
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LRRK2-IN-1 是一種有效的，選擇性的 LRRK2 抑制劑，作用于 LRRK2 (G2019S) 和 LRRK2 (WT)，IC50 值分別為 6 nM 和 13 nM。
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相關(guān)類別
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信號(hào)通路 >> 自噬 >> LRRK2
研究領(lǐng)域 >> 神經(jīng)**
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靶點(diǎn)
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IC50: 13 nM (WT), 6 nM (G2019S)
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體外研究
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野生型和G2019S轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致TR-FRET信號(hào)高2.5倍，LRRK2-IN-1可以劑量依賴性方式抑制，IC50值分別為0.08μM和0.03μM[1]。 LRRK2-IN-1對(duì)DCLK2的抑制具有45nM的IC50，并且當(dāng)在AURKB，CHEK2，MKNK2，MYLK，NUAK1和PLK1的生化測定中評(píng)估時(shí)，IC50顯示大于1μM。確認(rèn)LRRK2-IN-1抑制MAPK7，EC50為160nM。 LRRK2-IN-1誘導(dǎo)Ser910和Ser935磷酸化的劑量依賴性抑制，伴隨14-3-3與野生型LRRK2和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞的LRRK2 [G2019S]的結(jié)合喪失[2]。 LRRK2-IN-1具有中等細(xì)胞毒性，HepG2細(xì)胞中IC50為49.3μM。 LRRK2-IN-1在存在和不存在S9時(shí)分別在15.6和3.9μM時(shí)表現(xiàn)出遺傳毒性[3]。 LRRK2-IN-1抑制增殖，遷移和誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，具有HCT116和AsPC-1細(xì)胞凋亡的標(biāo)志[4]。
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體內(nèi)研究
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LRRK2-IN-1（100 mg / kg，ip）誘導(dǎo)小鼠腎臟中LRRK2的去磷酸化[2]。瘤周注射LRRK2-IN-1（100mg / kg）導(dǎo)致腫瘤體積和AsPC-1腫瘤異種移植物重量的顯著降低[4]。
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激酶實(shí)驗(yàn)
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活化GST-LRRK2（1326-2527），GST-LRRK2 [G2019S]（1326-2527），GST-LRRK2 [A2016T]（1326-2527）和GST-LRRK2 [A2016T + G2019S]（1326-2527）酶被純化在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染合適的cDNA構(gòu)建體后36小時(shí)，用來自HEK293細(xì)胞裂解物的谷胱甘肽瓊脂糖凝膠。一式兩份進(jìn)行肽激酶測定，在50mM Tris / HCl，pH 7.5,0.1mM的50mM Tris / HCl中，含有0.5μgLRRK2激酶（純度約10％，終濃度為8 nM）的總體積為40μL。 EGTA，10mM MgCl2,20μMN含，0.1μM[γ-32P] ATP（500cpm / pmol）和指定濃度的抑制劑溶解在DMSO中。在30℃溫育15分鐘后，通過將35μL反應(yīng)混合物點(diǎn)在P81磷酸纖維素紙上并浸入50mM磷酸中終止反應(yīng)。廣泛洗滌樣品，通過切倫科夫計(jì)數(shù)定量[γ-32P] ATP向Nictide中的摻入。使用GraphPad Prism使用非線性回歸分析計(jì)算IC 50值。
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細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
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將細(xì)胞（每孔104個(gè)細(xì)胞）一式三份接種到96孔組織培養(yǎng)板中。在存在LRRK2-IN-1的情況下，用DMSO作為載體，在0,0.31,0.63,1,2和5,10和20μM下培養(yǎng)細(xì)胞。處理后48小時(shí)，向每個(gè)孔中加入10μLTACSMTT試劑，并將細(xì)胞在37℃溫育直至細(xì)胞中可見深色結(jié)晶沉淀。然后將100μL在DMSO中的266mM NH 4 OH加入孔中并以低速放置在平板振蕩器上1分鐘。搖動(dòng)后，將平板在光照下孵育10分鐘，并使用酶標(biāo)儀讀取每個(gè)孔的OD550。將結(jié)果平均并計(jì)算為DMSO（媒介物）對(duì)照的百分比+/-平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差。
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動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
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將LRRK2-IN-1溶解于Captisol中，并通過腹膜內(nèi)注射給予野生型雄性C57BL / 6小鼠，劑量為100mg / kg。對(duì)照小鼠注射等體積的Captisol。在1小時(shí)和2小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)，通過頸椎脫位對(duì)小鼠進(jìn)行熄滅，并快速解剖腎臟和腦組織并在液氮中快速冷凍。
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參考文獻(xiàn)
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[1]. Hermanson SB, et al. Screening for Novel LRRK2 Inhibitors Using a High-Throughput TR-FRET Cellular Assay for LRRK2 Ser935 Phosphorylation.PLoS One. 2012;7(8):e43580. Epub 2012 Aug 28.
[2]. Deng, Xianming., et al. Characterization of a selective inhibitor of the Parkinson's disease kinase LRRK2. Nature Chemical Biology (2011), 7(4), 203-205.
[3]. Koshibu K, et al. Alternative to LRRK2-IN-1 for Pharmacological Studies of Parkinson's Disease. Pharmacology. 2015;96(5-6):240-7.
[4]. Weygant N, et al. Small molecule kinase inhibitor LRRK2-IN-1 demonstrates potent activity against colorectal and pancreatic cancer through inhibition of doublecortin-like kinase 1. Mol Cancer. 2014 May 6;13:103.
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LRRK2-IN-1物理化學(xué)性質(zhì)
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密度
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1.3±0.1 g/cm3
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沸點(diǎn)
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787.8±70.0 °C at 760 mmHg
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分子式
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C31H38N8O3
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分子量
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570.685
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閃點(diǎn)
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430.3±35.7 °C
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精*確質(zhì)量
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570.306702
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PSA
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100.76000
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LogP
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0.36
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蒸汽壓
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0.0±2.7 mmHg at 25°C
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折射率
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1.641
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LRRK2-IN-1英文別名
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6H-Pyrimido[4,5-b][1,4]benzodiazepin-6-one, 5,11-dihydro-2-[[2-methoxy-4-[[4-(4-methyl-1-piperazinyl)-1-piperidinyl]carbonyl]phenyl]amino]-5,11-dimethyl-
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LRRK2-IN-1
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2-[(2-Methoxy-4-{[4-(4-methyl-1-piperazinyl)-1-piperidinyl]carbonyl}phenyl)amino]-5,11-dimethyl-5,11-dihydro-6H-pyrimido[4,5-b][1,4]benzodiazepin-6-one
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2-((2-Methoxy-4-(4-(4-methylpiperazin-1-yl)piperidine-1-carbonyl)phenyl)amino)-5,11-dimethyl-5H-benzo[e]pyrimido[5,4-b][1,4]diazepin-6(11H)-one
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L
