取材:
1. 用頸椎脫位法使孕鼠迅速死亡。
2. 把整個(gè)孕鼠浸入盛有75%乙醇的燒杯中數(shù)秒鐘**,取出后放在大平皿中攜入超凈臺(tái)。
3. 用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口,用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。
4. 用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部,取出含有胚胎的**,置于無菌的培養(yǎng)皿上。
5. 剔除胚胎周圍的包膜(若胚胎較大,應(yīng)剪去頭、爪),將胚胎放于無菌的含有平衡鹽溶液的培養(yǎng)皿中。用平衡鹽溶液漂洗胚胎至清洗液清亮。
切割(2人一組):
6. 將部分胚胎轉(zhuǎn)移至一個(gè)無菌小瓶中,用平衡鹽溶液漂洗。
7. 然后用眼科手術(shù)剪刀小心地反復(fù)剪切胚胎,直到成1mm3左右的小塊,再用平衡鹽溶液清洗組織塊至清洗液清亮。
8. 靜置數(shù)分鐘,使組織塊自然沉淀到管底,棄去上清。
消化、接種培養(yǎng)(2人一組):
9. 視組織塊量加入5—6倍的0.25%胰酶液(約3ml),37℃中消化20—40分鐘,每隔5分鐘振蕩一次。
10. 靜置,吸去上清,加2ml細(xì)胞生長液,用吸管反復(fù)吹打組織塊,使細(xì)胞分離,靜置,使未分散的組織塊下沉。
11. 取部分細(xì)胞懸液接種至加了細(xì)胞生長液(約3ml)的培養(yǎng)瓶中(若計(jì)數(shù),按每細(xì)胞瓶1x 106細(xì)胞的數(shù)量接種),置于37℃,二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)3~5天觀察結(jié)果。
上海創(chuàng)賽科學(xué)儀器有限公司(Shanghai Canspec Scientific Instruments Co., Ltd.),是一家致力于實(shí)驗(yàn)室全套用品和設(shè)備(包括:生物、化學(xué)化工、實(shí)驗(yàn)耗材、儀器設(shè)備等)的集約化供應(yīng)商,竭誠為國內(nèi)各行業(yè)提供實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品。詳情請(qǐng)登錄:http://www.ahbcpqn.cn