試劑、試劑盒 1. Ficoll(Amersham Biosciences)2.冰冷磷酸鹽緩沖液(PBS)，pH 7.43. 裂解緩沖液：5mol/L單巰基氰酸胍，10mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)，50mm
儀器、耗材 1. 30m1Corex管，酸洗并硅化2. 預(yù)冷離心機(jī)和吊桶式轉(zhuǎn)頭
實(shí)驗步驟 1．收集新鮮人血液并立即用Ficoll分離白細(xì)胞。
2．用冰冷PBS洗滌外周血**細(xì)胞3次。
3．在50ml塑料離心管中收集外周血**細(xì)胞，并加入7ml裂解緩沖液(可溶解達(dá)到5×108個外周血**細(xì)胞)，然后劇烈渦旋振蕩以溶解細(xì)胞。
4．加入7體積(49m1)4mol/L氯化鋰，4℃孵育15～20小時(過夜)。
5．將懸液轉(zhuǎn)移到30mlCorex管內(nèi)，在吊桶式轉(zhuǎn)頭內(nèi)4℃離心2小時，6500r/min。
6．棄去上清，并用Kimwipe擦拭試管口。用3mol/L氯化鋰(大約15ml)重懸，收集沉淀.將沉淀重懸液離心，6500r/min 1小時。
7．棄去上清，用2m1RNA溶解液溶解沉淀。在-20℃下，徹底冷凍懸液。
8．復(fù)溶懸液，每10分鐘渦旋20秒，共45分鐘。
9．用等體積酚抽提1次，并用等體積氯仿抽提1次。
10．加入1/10體積的3mol/L乙酸鈉，pH 4.8和2體積一20℃乙醇。徹底混合溶液，并在-20℃下孵育過夜。
11．在吊桶式轉(zhuǎn)頭內(nèi)離心RNA，12000r/min 30分鐘。用0.2m1DEPC處理水重懸沉淀。將溶解的DNA轉(zhuǎn)移至1.5m1微量離心管內(nèi)，并加入1/10體積3mol/L乙酸鈉，pH 4.8和2體積-20℃乙醇，重新沉淀。并以乙醇沉淀物形式保存RNA，直至準(zhǔn)備使用時。
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